Ultramicroscope

L’ultramicroscope (LaVision Biotec) est un microscope à fluorescence basé sur une illumination par feuillet de lumière. L’éclairage s’effectue donc perpendiculairement au plan d’acquisition par une feuille de lumière comprise entre 4 et 10 µm d’épaisseur et de la largeur de l’ensemble de l’échantillon. Afin de limiter les artefacts la feuille de lumière est divisée en trois sous-faisceaux qui convergent vers l’échantillon avec des angles différends, ce qui permet d’éviter les phénomènes d’ombrage courant avec cette technique. Par ailleurs l’illumination peux venir de la gauche ou de la droite ou des deux cotés successivement afin d’obtenir la meilleure image possible suivant l’échantillon et la zone à imager. Le microscope est équipé d’une camera très sensible (CMOS) et très résolutive (2560×2160 pixels par image). Les grandissement disponibles (de 1.26 à 12.6 X) permettent une exploration optimale d’organe entier jusqu’aux niveaux cellulaire et sub-cellulaire. Équiper d’un laser blanc (laser pulsé picoseconde couplé à une fibre spectralement dispersante générant un supercontinuum allant de 450 nm à plus de 900 nm), nous avons la possibilité d’imager n’importe quel fluorophore dans le visible et l’infrarouge proche. Cette technologie implique d’utiliser des échantillons clarifiés dont les techniques de production sont maintenant bien établie et les protocoles performant. la taille du volume que l’on peut imager est de l’ordre du centimètre cube à une résolution de l’ordre du micromètre dans le plan et de 2 micromètre en profondeur.